细胞爬片是细胞生物学商讨中的常用时代现金足球外盘app平台，用于不雅察细胞情势、进行荧光染色或酶标检测。TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）实践则是检测细胞凋一火的病笃方法，它通过标志细胞DNA链断裂产生的3’-OH结尾来标志凋一火细胞。用细胞爬片检测细胞凋一火时，细胞容易在实践经由中脱片，影响实践的驱散和数据的着实度。今天Elabscience将和公共全部探讨细胞爬片TUNEL实践中脱片产生的原因及影响，并共享灵验的防脱片门径。

一、脱片的原因与影响

用细胞爬片进行TUNEL实践，脱片的主要原因不错归结为以下几点：

① 细胞本人的黏效能较差，未能安定附着于玻片名义，导致在洗涤、染色和反映设施中容易败落。

② 实践条目欠妥，导致细胞凋一火过度而脱片。

③ 实践设施中的固定欠妥、冲洗过于剧烈、反映温度与时辰舍弃欠安等王人可能形成细胞脱片。

图1. 细胞爬片脱片（大鼠肺大动脉内皮细胞，DAPI染色）

脱片的影响体当前多个方面：

率先，脱片会导致玻片上细胞数目减少，影响样本的代表性（图1）。尤其是当细胞脱片较为严重时，玻片上的细胞数目可能不及以进行准确的统计学分析。

其次，脱片还会导致细胞染色不均匀（图2），尤其是在TUNEL实践中，这可能会影响凋一火细胞的检测。脱片引起的细胞散播不均会干涉荧光信号的不雅察，从而误导实践数据的解读。

为了保证据践驱散的相识性和可靠性，必须采纳灵验的门径来减少细胞脱片的发生。

图2. 脱片导致荧光信号散播不均（小鼠神经星形胶质细胞，DAPI染色）

二、防护脱片的门径

针对细胞爬片TUNEL实践中脱片的原因，咱们不错从以下几个方面优化实践条目，以减少细胞脱片：

1. 采用合适的载玻片

玻片的采用是防护细胞脱片的要紧要害。一般提议使用经过败落处置的载玻片，如聚-L-赖氨酸（Poly-L-lysine）涂覆的玻片或细胞培养专用的玻片。这些玻片通过改性处置增强了细胞在玻片名义的黏效能，从而减少实践经由中的脱片景观。此外，也不错琢磨使用胶原卵白涂覆的玻片，这种玻片适用于需要模拟细胞外基质环境的实践。

2. 舍弃实践条目

筹备实践时不错先进行预实践，细目好最好的实践条目（药物处置浓度、培养时辰等），防护细胞因凋一火过度而脱片。

图3. 不同浓度（左10 μm，右5 μm）喜树碱处置的Hela细胞爬片，用一步法TUNEL原位细胞凋一火检测试剂盒

（红色，Elab Fluor® 594）（E-CK-A322）染色实践驱散

图3中实践驱散不错看出，左侧实践条目导致细胞凋一火过度，细胞密度较右图低，凋一火数目比右图高。

因此，筹备实践时要建造平允置的条目，防护细胞凋一火过度。若是实践条目无法转换，不错采集培养液中凋一火的细胞均匀涂在爬片上制备成细胞涂片后再进行TUNEL实践，概况采用流式TUNEL检测（推选：Elabscience®一步法TUNEL流式凋一火检测试剂盒，检测驱散可通过流式细胞仪进行分析，更适用悬浮细胞、贴壁细胞的TUNEL检测）。

3. 舍弃细胞密度

在细胞接种时，应合理舍弃细胞密度。若是细胞接种过少，细胞之间枯竭相互扶持，更容易在实践经由中脱片。因此，把柄细胞类型的不同，细目稳妥的接种密度，使细胞在玻片上能较好地铺展并附着。

4. 进行稳妥的细胞固定

固定设施是TUNEL实践中格外要害的一步。频频使用4%的多聚甲醛进行细胞固定，固定时辰舍弃在10-20分钟之间。固定时辰过短可能导致细胞未能十足固定，从而在后续的设施中脱片；而固定时辰过长，则可能引起细胞的情势改变导致黏效能消弱。因此，应把柄细胞类型和实践条目，优化固定时辰，以达到最好的固定驱散。

5. 严格舍弃细胞通透的条目

细胞爬片的通透一般采用0.2%的Triton X-100溶液，若是采用卵白酶K，可能会导致细胞败落（图4所示）。

图4. 不同通透方法对比（左图：卵白酶K通透，右图：0.2%Triton X-100通透）

图4中不错看出，通透对TUNEL实践驱散影响显贵，细胞爬片的通透剂应采用0.2%Triton X-100。同期还需瞩目：Triton X-100溶液用PBS稀释，Triton X-100的浩繁高，可提前1-2天配制并放在4℃保存。

6. 采纳温暖的洗涤方法

洗涤设施是细胞脱片的高风险要害。提议在洗涤时幸免剧烈的搅动或冲洗，应采纳徐徐加液或轻轻倾倒的神色来更换缓冲液。同期，洗涤液的温度应尽量接近室温，幸免温差过大引起细胞的应激反映，从而增强细胞的附着相识性。

但愿这些防脱片的处置方法，能为公共的TUNEL实践添砖加瓦，培育实践的相识性和数据的可靠性。对于TUNEL实践细胞爬片脱片的先容到此竣事，接待激情Elabscience®现金足球外盘app平台，解锁更多细胞景色检测实践技巧。